**培养条件**：
培养气相：95%空气 + 5%二氧化碳；温度：37℃。
**传代方法**：第一次建议1:2传代。
传代情况：每两天更换培养液。
**备注**：建议同时购买完培，购买时可享受极具优惠的价格。收到细胞后，在处理并培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。

收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放置于超净台内，以确保严格的无菌操作。接着，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以便稳定细胞状态后再进行后续处理。
通过显微镜观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片进行保存（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据，若不提供照片则默认为收到的状态良好。

**细胞培养步骤**:
a、细胞传代：如果细胞未超过80%汇合度，将瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，并放入37℃、5% CO2孵箱中培养；如果细胞密度超过80%，则可进行传代培养。贴壁细胞的传代步骤如下：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，之后在显微镜下观察细胞消化情况。如果细胞大部分变圆且脱落，迅速取回操作台，轻轻敲击培养瓶后，加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落并吸出悬液，然后将其转移至15ml的离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞的传代步骤如下：
1. 半换液法：将培养瓶直立于培养箱中静置约1小时，轻轻吸出3ml左右培养基，然后配补3ml的完全培养基。如果培养基颜色变化缓慢，可以直接添加约500ul FBS。在传代时可直接补给5ml培养基，分成两个培养瓶进行；一般进行约3次的传代后可进行离心传代以去除死细胞。
2. 离心换液法：如需分瓶，可以将细胞悬液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液后重悬混匀。然后将细胞悬液按1:2的比例分至新的T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞生长活力，后续传代可根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

b、细胞冻存：
1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞变形，待细胞缩回变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM下离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞，加入1ml的不朽情缘MG无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如果后期要转入液氮罐中，则需要先在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c、细胞复苏：
1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴适当防护器具），快速将其置于37℃水浴中进行解冻，直至冻存管内无结晶形成，之后用75%的酒精清洁冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含有5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶中，置于37℃、5% CO2细胞培养箱中进行培养。
4. 第二天，换用新鲜的完全培养基继续培养。

**注意事项**：部分细胞可能在运输过程中因附着不牢而发生脱落现象，这属于正常情况。如果脱落较多，可将培养瓶内的所有培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，获取上清进行过渡培养（后期可与对照培养进行比较），将沉淀加入1-2ml胰酶，轻轻吹打并重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再进行离心，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。如此进行1:2比例分瓶传代（两个T25），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中进行培养。