不朽情缘MG致力于研究破骨细胞的诱导分化机制。破骨细胞是一类特殊的多核细胞，源于造血干细胞分化而来的巨噬细胞，主要负责骨吸收过程。调控破骨细胞分化的核心信号通路为RANKL/RANK/OPG，该通路可以精细调节破骨细胞和成骨细胞的活性平衡，从而确保骨骼的稳态。

核因子κB受体激活因子配体（RANKL）被认为是促进破骨细胞分化和功能活性的重要因子。它的产生依赖于M-CSF的诱导，后者能够促使破骨细胞前体细胞膜上表达RANK，进而引发破骨细胞分化。体内破骨细胞的数量较少，仅占分离细胞的0.8%-1.2%，在体外分离培养时相对困难。目前，主要采用诱导法来获取破骨细胞，常用的方法包括骨髓单核细胞诱导法和RAW264.7细胞系诱导法。

骨髓单核细胞诱导法

1. 选用8-12周龄的雄性C57BL/6J小鼠，进行CO2吸入处理后，浸泡于75%乙醇中进行消毒。
2. 在无菌操作下，完整切除小鼠后肢，去除股骨和胫骨的多余皮肤与肌肉，然后将骨头置于4°C的PBS溶液中。
3. 分离胫骨和股骨，使用含有青霉素-链霉素的PBS溶液清洗，确保无菌。
4. 用注射器向骨头注入α-MEM培养基，冲洗骨髓细胞，并通过细胞筛过滤至离心管中。
5. 离心后加入红细胞裂解缓冲液，终止溶解过程。
6. 重悬细胞并转移至含M-CSF的培养基中培养，随后继续培养至破骨细胞形成。

RAW264.7细胞系诱导法

1. 常规培养RAW264.7细胞于含10%FBS的DMEM培养基中，维持在37°C和5% CO₂的环境中，当细胞达到80%-90%汇合度时进行传代。
2. 使用α-MEM培养基将细胞制成悬液，接种到24孔板中，确保细胞浓度适当，优化破骨细胞诱导效果。
3. 细胞接种12小时后，加入RANKL。
4. 每三天更换培养基并补加RANKL，以促进破骨细胞的分化。
5. 在分化培养的4-6天后，进行TRAP染色以鉴定破骨细胞的形成。

不朽情缘MG提供高活性和高一致性的重组M-CSF和RANKL蛋白，以帮助研究人员高效诱导破骨细胞。我们的产品已通过细胞增殖实验验证，显示出显著的生物活性，确保在破骨细胞诱导实验中获得最佳效果。