不朽情缘MG细胞培养指南：人肺动脉平滑肌HPASMC

一、细胞培养条件

细胞名称：人肺动脉平滑肌HPASMC
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：SMCM（ScienCell，1101）
传代方法：第一次建议1:2传代
传代情况：2天换液
备注：用无菌离心管收集培养基，留作过渡对比培养。如果对比效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理方法

收到细胞后，培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳处理方式。收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶，进行消毒，随后放入超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。用显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存（最好包含40x、100x、200x的视野），前三天的照片也是重要的售后依据，未提供照片默认状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞未超过80%的汇合度，先将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基于37℃、5% CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，则可进行传代。具体步骤如下：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，浸泡于37℃培养箱中1-2分钟，观察细胞状态。
3. 迅速将细胞转移至离心管中，继续处理。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液。
3. 离心并收集细胞沉淀，加入1ml 不朽情缘MG无血清冻存液，混匀后存入冻存管中。
4. 冻存细胞应直接放入-80℃冰箱，并在转入液氮罐前存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，迅速置于37℃水浴解冻，擦拭外壁消毒。
2. 移至含5ml完全培养基的离心管中，离心5分钟后弃上清。
3. 用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶。
4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能不牢固，导致脱落现象属正常。如果脱离细胞数量较多，应重新收集培养液进行离心，再进行对比培养。同时，处理过程中注意操作细致，以确保细胞存活率。

五、售后条款

1）细胞出现问题时，重发的情况包括：
- 运输过程中细胞丢失或瓶身破损。
- 收到后48小时内发现感染问题，需提供实验结果。
- 干冰运输且存活率低于标准的，可申请重发。

2）不予重发的情况包括：
- 客户造成的细胞污染或不当操作。
- 未提供前期照片或处理不当导致的状态不良。
- 需提供真实有效的实验数据作为依据。

请注意，遵循上述步骤及注意事项有助于提高培养与传代细胞的成功率，不朽情缘MG致力于为您提供高质量的细胞培养服务。